Zap-70 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400826

概要

ZAP70 は、LCK による CD3/ζ 鎖のリン酸化に続く、近位の T 細胞受容体（TCR）シグナル伝達に必須の細胞質チロシンキナーゼである Zap-70 をコードします。リン酸化された ITAM にリクルートされると、Zap-70 は LAT や SLP-76 などのアダプタータンパク質をリン酸化し、PLCγ1 の活性化、Ca²⁺フラックス、MAPK カスケード、NF-κB/NFAT を介する転写プログラム、ならびに細胞骨格の再構築を伝播させるシグナルソームの集合を協調して制御します。これらの経路は、胸腺細胞の選択、T 細胞の活性化・分化・エフェクター機能を制御し、ZAP70 活性を免疫恒常性と結び付けています。ZAP70 の発現量やシグナル伝達ダイナミクスの変化は、免疫不全の表現型や、自己免疫疾患および血液疾患の文脈で観察されるリンパ球活性化の制御異常と関連付けられています。

Zap-70 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるZAP70遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ZAP70内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ZAP70のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Zap-70タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Zap-70シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ZAP70欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Zap-70の機能に不可欠なZAP70エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ZAP70ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Zap-70 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびZap-70 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ZAP70遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Zap-70 HDRプラスミド（h）および Zap-70 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはZAP70ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のZAP70標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。