ZAG CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419279

概要

Azgp1は、亜鉛α2糖タンパク質（ZAG）をコードしている。ZAGは分泌型でアディポカイン様の糖タンパク質であり、複数の組織で発現し、全身的な脂質動員とエネルギーバランスの維持に寄与する。マウスの代謝ネットワークでは、ZAGは脂肪細胞のリポリシス（脂肪分解）の制御、脂肪酸利用の調節、ならびに脂肪組織および肝臓の微小環境における炎症シグナルとのクロストークに関与することが示唆されている。Azgp1/ZAGの発現変化は、肥満に関連した代謝機能障害やインスリン感受性の変化に加え、より広い悪液質や炎症に関連する表現型の文脈でもしばしば研究対象となる。循環因子であり、細胞外マトリックス関連因子でもあるZAGは、組織リモデリングや細胞間コミュニケーションの研究においても重要である。

ZAG CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAzgp1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Azgp1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Azgp1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ZAGタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ZAGシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Azgp1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ZAGの機能に不可欠なAzgp1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Azgp1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ZAG CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびZAG CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Azgp1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ZAG HDRプラスミド（m）および ZAG HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAzgp1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAzgp1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。