YME1L1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-409793-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- YME1L1 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- YME1L1ダブルニカースプラスミド（h）およびYME1L1ダブルニカースプラスミド（h2）は、YME1L1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
YME1L1 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-409793-NIC | 20 µg | $410.00 |
YME1L1は、ミトコンドリア内膜に局在するAAA+型ATP依存性メタロプロテアーゼをコードしており、折り畳み不全タンパク質や過剰な膜結合タンパク質を分解するとともに、呼吸鎖の主要因子や膜形態形成因子のターンオーバーを制御することで、ミトコンドリアのプロテオスタシスを維持します。内膜の品質管理とタンパク質複合体の再編成を通じて、YME1L1は酸化的リン酸化の効率、ミトコンドリア動態、ならびにエネルギー恒常性に関わるストレス応答性シグナル伝達経路に寄与します。YME1L1機能の破綻は、クリステ構造の変化、呼吸機能低下、プロテオトキシックストレスに対する感受性亢進など、ミトコンドリア機能障害に関連する表現型と結び付けられています。これらの特徴から、YME1L1はミトコンドリア維持の機構や、神経変性を含むミトコンドリア関連疾患に関与する経路の解明において重要な研究対象となります。
YME1L1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における YME1L1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、YME1L1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、YME1L1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、YME1L1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。