WTAP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-425635

概要

Wtap は、mRNA の N6-メチルアデノシン（m6A）ライター複合体の中核的な制御因子である WTAP（Wilms tumor 1–associating protein）をコードする。WTAP は METTL3/METTL14 の触媒活性を支えるとともに、メチル化機構の核内局在を協調的に制御する。m6A 依存的な pre-mRNA 処理、選択的スプライシング、転写産物の安定性、翻訳の制御を通じて、WTAP は細胞周期の進行、系譜決定、ストレス応答性の遺伝子発現プログラムに影響を与える。WTAP 活性は核内スペックルにおける RNA 代謝経路と連関し、エピトランスクリプトーム制御を発生シグナルや分化ネットワークへ結び付ける。WTAP に関連する m6A 付加の破綻は、がん生物学に関連する増殖・分化状態の変化や、モデル系における造血および発生表現型に関与することが示唆されている。

WTAP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるWtap遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Wtap内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Wtapのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、WTAPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、WTAPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Wtap欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• WTAPの機能に不可欠なWtapエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Wtapゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• WTAP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびWTAP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Wtap遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  WTAP HDRプラスミド（m）および WTAP HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはWtapホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のWtap標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。