WTAP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-425635

Panoramica

Wtap codifica WTAP (proteina associata a Wilms tumor 1), un componente regolatorio centrale del complesso “writer” della N6-metiladenosina (m6A) dell’mRNA, che supporta l’attività catalitica di METTL3/METTL14 e coordina la localizzazione nucleare del macchinario di metilazione. Attraverso il controllo m6A-dipendente dell’elaborazione del pre-mRNA, dello splicing alternativo, della stabilità dei trascritti e della traduzione, WTAP influenza la progressione del ciclo cellulare, la specificazione di linea e i programmi di espressione genica responsivi allo stress. L’attività di WTAP interagisce con le vie del metabolismo dell’RNA negli speckle nucleari e collega la regolazione epitranscrittomica alle reti di segnalazione dello sviluppo e di differenziamento. Una deposizione di m6A associata a WTAP deregolata è stata implicata in stati alterati di proliferazione e differenziamento rilevanti per la biologia del cancro e per fenotipi ematopoietici e dello sviluppo in sistemi modello.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO WTAP (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Wtap in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Wtap insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Wtap a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina WTAP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Wtap per lo studio della segnalazione di WTAP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Wtap critici per la funzione di WTAP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Wtap per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal WTAP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal WTAP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Wtap. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal WTAP Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR WTAP (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Wtap per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Wtap definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.