Wnt-5b Plasmídeo de ativação de CRISPR (h2): sc-402157-ACT-2

O WNT5B humano codifica o ligante secretado Wnt-5b, um mediador-chave da sinalização Wnt independente de β-catenina (não canônica), que regula a polaridade celular, a migração direcional e a remodelação do citoesqueleto por meio de vias como a polaridade celular planar e a sinalização Wnt/Ca²⁺. O Wnt-5b interage com receptores Frizzled e correceptores (incluindo proteínas da família ROR) para modular efetores a jusante que moldam a morfogênese tecidual, a diferenciação mesenquimal e a comunicação cruzada com a sinalização inflamatória. Alterações na expressão ou na sinalização de WNT5B têm sido associadas à desregulação de programas de desenvolvimento e são frequentemente investigadas em contextos como a invasividade de células tumorais, a regulação metabólica e adipogênica e a remodelação fibrótica. A edição gênica de WNT5B dá suporte a estudos mecanísticos do “arranjo” específico de ligantes na rede Wnt, do uso de receptores e dos desfechos transcricionais e fenotípicos em modelos celulares engenheirados e em sistemas de organoides.

Wnt-5b O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de WNT5B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Wnt-5b O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus WNT5B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição WNT5B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Wnt-5b. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus WNT5B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Wnt-5b no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Wnt-5b em células tumorais com expressão de WNT5B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.