Wnt-3a Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423716
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Wnt-3a El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Wnt-3a, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Wnt-3a Anticuerpo (3A6): sc-136163
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Wnt-3a Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423716 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen murino Wnt3a codifica la glucoproteína secretada Wnt-3a, un ligando clave en la señalización canónica Wnt/β-catenina que regula el patrón embrionario, el mantenimiento de células madre y la morfogénesis tisular. La unión de Wnt-3a a los receptores Frizzled/LRP estabiliza la β-catenina, lo que permite programas transcripcionales dependientes de TCF/LEF que coordinan la proliferación, la diferenciación y las decisiones de destino celular. Además de sus funciones en el desarrollo, la actividad de Wnt3a se interrelaciona con vías que controlan la dinámica epitelio-mesenquimal, la organogénesis y las respuestas regenerativas. La señalización desregulada de Wnt-3a se estudia con frecuencia en contextos de señalización aberrante de β-catenina, incluida la transformación oncogénica y los defectos del desarrollo, lo que la convierte en un nodo central para la investigación de vías y mecanismos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Wnt-3a (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Wnt3a en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Wnt3a junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Wnt3a tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Wnt-3a.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Wnt3a para la investigación de la señalización de Wnt-3a, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Wnt3a críticos para la función de Wnt-3a
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Wnt3a para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Wnt-3a CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Wnt-3a CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Wnt3a. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Wnt-3a (m) y el plásmido HDR Wnt-3a (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Wnt3a para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Wnt3a definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.