Wnt-3a CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423716

概要

マウスWnt3aは、分泌性糖タンパク質であるWnt-3aをコードしており、胚のパターニング、幹細胞の維持、組織形態形成を制御するカノニカルなWnt/β-カテニンシグナル伝達における主要なリガンドです。Wnt-3aがFrizzled/LRP受容体に結合するとβ-カテニンが安定化し、TCF/LEF依存的な転写プログラムが作動して、増殖、分化、細胞運命決定を協調的に制御します。発生における役割に加えて、Wnt3aの活性は上皮—間葉ダイナミクス、器官形成、再生応答を制御する経路とも交差します。Wnt-3aシグナルの破綻は、がん化や発生異常などβ-カテニンシグナルの異常活性化を伴う状況で頻繁に研究されており、本経路や作用機序研究における中心的なノードとなっています。

Wnt-3a CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるWnt3a遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Wnt3a内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Wnt3aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Wnt-3aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Wnt-3aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Wnt3a欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Wnt-3aの機能に不可欠なWnt3aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Wnt3aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Wnt-3a CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびWnt-3a CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Wnt3a遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Wnt-3a HDRプラスミド（m）および Wnt-3a HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはWnt3aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のWnt3a標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。