WDR62 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-410410-ACT

WDR62 codifica uma proteína andaime contendo repetições WD que se localiza nos centrossomas e nos polos do fuso, coordenando a organização dos microtúbulos e a progressão mitótica. Está amplamente implicada na regulação do ciclo celular, na proliferação de progenitores neurais e na sinalização ativada por estresse, com interações descritas em redes de quinases mitóticas e em vias associadas ao JNK. Na biologia humana, o WDR62 tem sido associado a fenótipos do neurodesenvolvimento e a alterações na diferenciação neuronal, em linha com funções na divisão simétrica/assimétrica e no desenvolvimento cortical. Sua conectividade em vias o torna um alvo útil para dissecar mecanismos de estabilidade genômica, função do centrossoma e controle proliferativo em modelos celulares relevantes para doenças.

WDR62 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de WDR62 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

WDR62 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus WDR62 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição WDR62, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de WDR62. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus WDR62 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de WDR62 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via WDR62 em células tumorais com expressão de WDR62 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.