Plasmide CRISPR/Cas9 KO VpreB1 (m): sc-423683

Présentation

Vpreb1 code VpreB1, un composant de la chaîne légère de substitution qui s’associe à λ5 (IGLL1) et à la chaîne lourde μ des immunoglobulines pour former le récepteur du pré-lymphocyte B (pré-BCR) au cours des premières étapes de la lymphopoïèse B chez la souris. La signalisation du pré-BCR coordonne le franchissement du point de contrôle entre les stades pro-B et pré-B en favorisant la prolifération, en imposant l’exclusion allélique de la chaîne lourde et en initiant la recombinaison de la chaîne légère via des voies qui recoupent les kinases de la famille SRC, la signalisation SYK/BTK et, en aval, les programmes PI3K–AKT et MAPK. La perturbation de cet axe modifie la dynamique du développement des lymphocytes B, altère la formation du répertoire et peut influencer la compétence immunitaire ainsi que les mécanismes de tolérance. Étant donné que la fonction du pré-BCR est étroitement liée au contrôle des points de contrôle développementaux, Vpreb1 est fréquemment étudié dans des modèles de maturation anormale des lymphocytes B et de dérégulation immunitaire pertinents pour la recherche en hématologie et en auto-immunité.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO VpreB1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Vpreb1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Vpreb1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Vpreb1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine VpreB1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Vpreb1 pour l'étude de la signalisation de VpreB1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Vpreb1 essentiels à la fonction de VpreB1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Vpreb1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le VpreB1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le VpreB1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Vpreb1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le VpreB1 plasmide HDR (m) et le VpreB1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Vpreb1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Vpreb1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.