VpreB1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423683

概要

Vpreb1はVpreB1をコードしており、VpreB1は代替軽鎖（サロゲート軽鎖）成分としてλ5（IGLL1）および免疫グロブリンμ重鎖と対をなし、マウスにおけるBリンパ球系の初期段階でプレB細胞受容体（pre-BCR）を形成する。pre-BCRシグナルは、増殖の促進、重鎖アレリック・エクスクルージョン（対立遺伝子排除）の確立、ならびに軽鎖再構成の開始を通じて、プロB段階からプレB段階へのチェックポイント進行を統合的に制御する。この過程にはSRCファミリーキナーゼ、SYK/BTKシグナル、そして下流のPI3K–AKT系やMAPKプログラムと交差する経路が関与する。この軸が破綻すると、B細胞発生のダイナミクスが乱れ、レパトア形成が変化し、免疫能や寛容機構に影響しうる。pre-BCR機能は発生チェックポイント制御と密接に結び付いているため、Vpreb1は、血液学および自己免疫研究に関連するB細胞成熟異常や免疫調節異常のモデルで一般的に研究対象となる。

VpreB1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるVpreb1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Vpreb1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Vpreb1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、VpreB1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、VpreB1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Vpreb1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• VpreB1の機能に不可欠なVpreb1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Vpreb1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• VpreB1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびVpreB1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Vpreb1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  VpreB1 HDRプラスミド（m）および VpreB1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはVpreb1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のVpreb1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。