Vitamin D Receptor/VDR Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400171-ACT

VDR codifica o receptor de vitamina D, um fator de transcrição nuclear ativado por ligante que forma heterodímeros com o RXR para se ligar a elementos de resposta à vitamina D e coordenar programas gênicos que controlam a homeostase de cálcio e fosfato. Além do metabolismo mineral, o VDR regula a diferenciação epitelial, a modulação imune e a integridade de barreiras ao integrar sinais nas redes transcricionais responsivas a MAPK, NF-κB e citocinas. Alterações na atividade ou na expressão do VDR têm sido associadas a fenótipos inflamatórios e autoimunes, desregulação do controle do ciclo celular e mudanças dependentes do contexto em estados transcricionais associados a tumores. Essas funções tornam o VDR um nó central para o estudo da biologia de receptores de hormônios esteroides e da regulação gênica em diversos tipos celulares humanos.

Vitamin D Receptor/VDR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de VDR sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Vitamin D Receptor/VDR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus VDR em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição VDR, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Vitamin D Receptor/VDR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus VDR nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Vitamin D Receptor/VDR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Vitamin D Receptor/VDR em células tumorais com expressão de VDR silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.