VILIP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401100

概要

VSNL1は、EFハンドファミリーに属する神経細胞のカルシウムセンサーであるvisinin-like protein 1（VILIP-1）をコードします。VILIP-1はCa2+依存的な立体構造変化を起こし、ミリストイルスイッチを介して膜へ結合します。VILIP-1は細胞内カルシウム濃度の一過性変動をシグナル伝達の制御に結び付け、cAMP/cGMP関連経路、シナプス可塑性、神経突起伸長、活動依存的遺伝子発現に影響します。ヒト組織では神経系に多く発現しており、神経細胞の状態やカルシウムシグナル伝達ダイナミクスの指標（マーカー）として一般的に用いられます。VSNL1/VILIP-1の発現変化やカルシウム恒常性の破綻は、神経変性疾患および神経精神疾患の病態生物学と関連づけられており、神経細胞の脆弱性やストレス応答の機序研究を支持します。

VILIP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるVSNL1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、VSNL1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、VSNL1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、VILIP-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、VILIP-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、VSNL1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• VILIP-1の機能に不可欠なVSNL1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、VSNL1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• VILIP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびVILIP-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、VSNL1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  VILIP-1 HDRプラスミド（h）および VILIP-1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはVSNL1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のVSNL1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。