VGAT CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401850-ACT

SLC32A1は小胞性GABAトランスポーター（VGAT）をコードしており、VGATはシナプス小胞膜タンパク質として、GABAおよびグリシンを分泌小胞内に取り込ませ、抑制性神経伝達を可能にします。小胞への取り込みと量子サイズを制御することで、VGATは中枢神経系全体にわたり、興奮—抑制バランス、シナプス可塑性、ならびに神経回路ネットワークのオシレーションを調節します。SLC32A1/VGAT活性の破綻に伴う抑制性シグナル伝達の変化は、回路レベルの抑制が乱れるてんかん、不安関連表現型、神経発達障害、運動障害などの研究において重要です。小胞性トランスポーターとしてのVGATの機能は、シナプス小胞サイクル、神経伝達物質代謝、そしてイオン勾配依存的な輸送過程と交差し、抑制性シナプスの有効性を形作ります。

VGAT CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC32A1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

VGAT CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC32A1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC32A1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性VGATの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC32A1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるVGAT依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC32A1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるVGAT経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。