Veli1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406559

概要

LIN7AはVeli1をコードしており、Veli1はPDZドメインを持つ足場タンパク質として、膜貫通受容体やイオンチャネルを細胞骨格および輸送（トラフィッキング）機構へと連結することで、極性化した膜ドメインの構築を助けます。Veli1はCrumbs極性複合体および関連する側底膜（basolateral）ターゲティング過程に関与し、上皮細胞の極性、接着結合の健全性、受容体の局在に影響を与えます。MAGUKタンパク質やその他のPDZリガンドとの相互作用を介して、LIN7Aは細胞膜やシナプス区画におけるシグナル伝達の配置・組織化にも寄与します。細胞極性の破綻やシグナル複合体の誤局在は、神経発生やがん関連の文脈で研究される機序と広く関係するため、LIN7Aは経路解析（パスウェイの切り分け）に有用な標的となります。

Veli1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるLIN7A遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、LIN7A内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、LIN7Aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Veli1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Veli1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、LIN7A欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Veli1の機能に不可欠なLIN7Aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、LIN7Aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Veli1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびVeli1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、LIN7A遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Veli1 HDRプラスミド（h）および Veli1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはLIN7Aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のLIN7A標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。