Plasmide CRISPR d'Activation (m) VEGF-C: sc-423667-ACT

Le gène murin **Vegfc** code le facteur de croissance de l’endothélium vasculaire C (VEGF‑C), un ligand sécrété qui signale principalement via **VEGFR‑3/FLT4** afin de réguler la lymphangiogenèse et le remodelage des vaisseaux lymphatiques, avec des effets additionnels sur les programmes angiogéniques dans certains contextes. Le VEGF‑C influence la prolifération, la migration et la survie des cellules endothéliales, en s’intégrant aux voies de signalisation en aval **MAPK/ERK** et **PI3K/AKT** pour façonner la formation des réseaux vasculaires et la perméabilité. Dans les microenvironnements immunitaires et stromaux, les modifications lymphatiques induites par le VEGF‑C peuvent moduler l’équilibre des fluides interstitiels et le trafic des cellules immunitaires via les conduits lymphatiques. Une signalisation VEGF‑C/VEGFR‑3 dérégulée est associée à un remodelage lymphatique pathologique et est fréquemment étudiée dans des modèles d’inflammation, de fibrose tissulaire et de lymphangiogenèse associée aux tumeurs.

VEGF-C Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Vegfc sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

VEGF-C Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Vegfc dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Vegfc, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de VEGF-C. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Vegfc natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de VEGF-C au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie VEGF-C dans les cellules tumorales présentant une expression de Vegfc silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.