VEGF-B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401522-ACT

O VEGFB codifica o fator de crescimento endotelial vascular B (VEGF-B), um fator de crescimento secretado da família VEGF que sinaliza principalmente por meio de VEGFR1/FLT1 e do correceptor neuropilina-1. O VEGF-B está implicado na comunicação entre endotélio e parênquima, na regulação da homeostase vascular e na captação e no metabolismo de lipídios em tecidos com alta demanda energética, cruzando programas de sinalização angiogênicos e metabólicos. Em modelos celulares, pode influenciar vias de sobrevivência e respostas ao estresse, e sua expressão é frequentemente avaliada em conjunto com redes de detecção de hipóxia e nutrientes. A desregulação da sinalização de VEGFB tem sido associada na literatura a fenótipos cardiometabólicos e à patobiologia vascular, apoiando seu uso como um nó mecanístico em sistemas de pesquisa relevantes para doenças.

VEGF-B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de VEGFB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

VEGF-B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus VEGFB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição VEGFB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de VEGF-B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus VEGFB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de VEGF-B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via VEGF-B em células tumorais com expressão de VEGFB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.