VCX-C Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416596-ACT

VCX3B codifica a VCX-C, um membro da família de genes VCX/Y ligados ao X, predominantemente expresso em tecidos da linhagem germinativa masculina e implicado em programas transcricionais associados à espermatogénese. Embora a sua função molecular exata ainda não esteja totalmente definida, acredita-se que a VCX-C participe em processos regulatórios associados à cromatina e ao RNA que influenciam a expressão génica durante o desenvolvimento das células germinativas. Variações no número de cópias e a expressão desregulada de loci da família VCX no cromossoma X têm sido investigadas no contexto da infertilidade masculina e de uma instabilidade genómica mais ampla ligada ao X. Como alvo humano de VCX3B, a VCX-C constitui um nó útil para estudar a regulação génica na linhagem germinativa e a biologia de famílias de genes ligados ao X.

VCX-C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de VCX3B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

VCX-C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus VCX3B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição VCX3B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de VCX-C. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus VCX3B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de VCX-C no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via VCX-C em células tumorais com expressão de VCX3B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.