Plasmide CRISPR d'Activation (h) VCX-C: sc-416596-ACT

VCX3B code pour VCX‑C, un membre de la famille de gènes VCX/Y liée au chromosome X, exprimée principalement dans les tissus de la lignée germinale masculine et impliquée dans des programmes transcriptionnels associés à la spermatogenèse. Bien que sa fonction moléculaire précise reste imparfaitement définie, VCX‑C serait impliquée dans des processus régulateurs liés à la chromatine et à l’ARN qui modulent l’expression génique au cours du développement des cellules germinales. Les variations du nombre de copies et la dérégulation de l’expression des loci de la famille VCX sur le chromosome X ont été étudiées dans le contexte de l’infertilité masculine et, plus largement, de l’instabilité génomique liée à l’X. En tant que cible humaine de VCX3B, VCX‑C constitue un nœud utile pour étudier la régulation des gènes de la lignée germinale et la biologie des familles de gènes liées à l’X.

VCX-C Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de VCX3B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

VCX-C Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus VCX3B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription VCX3B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de VCX-C. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus VCX3B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de VCX-C au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie VCX-C dans les cellules tumorales présentant une expression de VCX3B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.