VCAM-1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400135-LAC

VCAM1 codifica a molécula de adesão celular vascular 1 (VCAM-1/CD106), um recetor induzível da superfamília das imunoglobulinas expresso em células endoteliais ativadas, que medeia a adesão firme e a transmigração de leucócitos através da ligação a integrinas como a VLA-4 (ITGA4/ITGB1). A sua expressão é fortemente aumentada por estímulos inflamatórios por meio de programas regulados por NF-κB e por citocinas, ligando a ativação vascular ao recrutamento de células imunitárias, à remodelação da barreira endotelial e a interações com a matriz extracelular. A VCAM-1 participa em redes de sinalização que coordenam a dinâmica do citoesqueleto e a adesão célula–célula durante respostas inflamatórias. A expressão desregulada de VCAM1 está associada a inflamação crónica e disfunção vascular, sendo frequentemente estudada em contextos como aterosclerose, patologia autoimune e endotélio associado a tumores.

As Partículas de Ativação Lentivirais VCAM-1 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de VCAM1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais VCAM-1 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição VCAM1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de VCAM-1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo VCAM1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.