VAX1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423657

概要

Vax1は、前脳および眼の胚発生パターニングに必須なホメオボックス型転写因子VAX1をコードしており、腹側終脳と視神経柄の発生において重要な役割を担います。VAX1は、神経前駆細胞の運命決定、軸索ガイダンス、正中線形成を協調させる遺伝子発現プログラムを制御し、SHH（ソニックヘッジホッグ）による腹側化などの発生シグナル経路や、他のホメオボックス遺伝子ネットワークと統合的に機能します。マウスの遺伝学的研究から、Vax1の機能不全は小眼球症／無眼球症や視床下部—下垂体領域の異常を含む先天性の頭蓋顔面・眼の表現型と関連することが示されています。これらの特性により、VAX1は神経発生の軌跡や系譜決定における転写制御を解析するうえで有用な結節点（ノード）となります。

VAX1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるVax1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Vax1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Vax1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、VAX1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、VAX1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Vax1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• VAX1の機能に不可欠なVax1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Vax1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• VAX1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびVAX1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Vax1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  VAX1 HDRプラスミド（m）および VAX1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはVax1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のVax1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。