Plasmide CRISPR/Cas9 KO VAX1 (m): sc-423657

Présentation

Vax1 code VAX1, un facteur de transcription à homéoboîte requis pour la mise en place embryonnaire du prosencéphale et de l’œil, jouant des rôles majeurs dans le développement du télencéphale ventral et de la tige optique. VAX1 régule des programmes d’expression génique qui coordonnent la spécification des progéniteurs neuraux, le guidage axonal et la formation de la ligne médiane, en s’intégrant à des voies de signalisation du développement telles que la ventralisation médiée par SHH et à d’autres réseaux d’homéoboîtes. Des études génétiques chez la souris ont associé un dysfonctionnement de Vax1 à des phénotypes congénitaux cranio-faciaux et oculaires, notamment la microphtalmie/anophtalmie et des anomalies de la région hypothalamo-hypophysaire. Ces caractéristiques font de VAX1 un nœud utile pour disséquer le contrôle transcriptionnel des trajectoires neurodéveloppementales et des choix de lignée.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO VAX1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Vax1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Vax1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Vax1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine VAX1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Vax1 pour l'étude de la signalisation de VAX1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Vax1 essentiels à la fonction de VAX1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Vax1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le VAX1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le VAX1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Vax1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le VAX1 plasmide HDR (m) et le VAX1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Vax1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Vax1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.