VAChT CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401240

概要

SLC18A3は小胞性アセチルコリントランスポーター（VAChT）をコードしており、VAChTはシナプス小胞膜に存在するタンパク質で、小胞膜のプロトン電気化学勾配を利用してアセチルコリンを分泌小胞内へ取り込みます。この小胞へのパッケージング過程は、神経筋接合部および中枢・末梢のコリン作動性回路における量子的（クオンタル）なコリン作動性神経伝達に必須です。VAChTの機能はアセチルコリンの合成・再利用（リサイクリング）経路とも連携し、シナプス前終末の小胞サイクルを制御されたエキソサイトーシスおよびシナプスシグナル伝達へと結び付けます。アセチルコリンの貯蔵障害に起因するコリン作動性トーンの変化は、神経発達および神経変性の表現型、自律神経機能障害、ならびに運動制御や認知に影響する疾患と関連づけられています。

VAChT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSLC18A3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SLC18A3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SLC18A3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、VAChTタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、VAChTシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SLC18A3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• VAChTの機能に不可欠なSLC18A3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SLC18A3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• VAChT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびVAChT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SLC18A3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  VAChT HDRプラスミド（h）および VAChT HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSLC18A3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSLC18A3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。