Plasmide CRISPR/Cas9 KO VAChT (h): sc-401240
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- VAChT Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique VAChT, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: VAChT Antibody (H-10): sc-518260
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO VAChT (h) | sc-401240 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
SLC18A3 code le transporteur vésiculaire de l’acétylcholine (VAChT), une protéine membranaire des vésicules synaptiques qui charge l’acétylcholine dans les vésicules de sécrétion en exploitant le gradient électrochimique de protons vésiculaire. Cette étape de conditionnement vésiculaire est indispensable à la neurotransmission cholinergique quantale aux jonctions neuromusculaires ainsi qu’au sein des circuits cholinergiques centraux et périphériques. La fonction de VAChT s’articule avec les voies de synthèse et de recyclage de l’acétylcholine, en couplant le cycle présynaptique des vésicules à l’exocytose régulée et à la signalisation synaptique. Des altérations du tonus cholinergique liées à une perturbation du stockage de l’acétylcholine ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, à des dysfonctions autonomes, ainsi qu’à des troubles affectant le contrôle moteur et la cognition.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO VAChT (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SLC18A3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SLC18A3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SLC18A3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine VAChT.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SLC18A3 pour l'étude de la signalisation de VAChT, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de SLC18A3 essentiels à la fonction de VAChT
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SLC18A3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le VAChT plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le VAChT plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SLC18A3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le VAChT plasmide HDR (h) et le VAChT (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SLC18A3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SLC18A3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.