V-ATPase D1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419255

概要

Atp6v0d1は、マウス細胞においてエンドソーム、リソソーム、その他の細胞内コンパートメントの酸性化を駆動するプロトンポンプである液胞型H\+-ATPase（V-ATPase）のV0ドメインを構成するD1サブユニットをコードします。V-ATPase依存的なpH制御は、受容体介在性エンドサイトーシス、オートファジーフラックス、リソソームでのタンパク質分解、膜輸送を支えるほか、mTORC1の栄養感知と結び付いたオルガネラ恒常性の維持にも寄与します。V-ATPase構成要素の障害は一般に、小胞ソーティングの異常、分解能の低下、シグナル伝達出力の変化と関連し、神経変性、免疫細胞機能、がんに伴う代謝適応に影響し得ます。そのためAtp6v0d1は、オルガネラの酸性化がプロテオスタシスやストレス応答経路とどのように交差するかを研究するうえで有用な結節点となります。

V-ATPase D1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAtp6v0d1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Atp6v0d1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Atp6v0d1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、V-ATPase D1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、V-ATPase D1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Atp6v0d1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• V-ATPase D1の機能に不可欠なAtp6v0d1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Atp6v0d1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• V-ATPase D1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびV-ATPase D1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Atp6v0d1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  V-ATPase D1 HDRプラスミド（m）および V-ATPase D1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAtp6v0d1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAtp6v0d1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。