Plasmide Double Nickase (h) V-ATPase C1: sc-402679-NIC

ATP6V1C1 code la sous-unité C1 de la H+-ATPase vacuolaire humaine (V-ATPase), au sein du domaine V1, composant central du secteur cytosolique qui hydrolyse l’ATP et fournit l’énergie nécessaire à la translocation des protons à travers les membranes endomembranaires et la membrane plasmique. L’acidification assurée par la V-ATPase est indispensable à la maturation endosome–lysosome, à l’endocytose médiée par les récepteurs, au flux autophagique et au trafic vésiculaire, et elle soutient le traitement pH‑dépendant des macromolécules dans les voies de sécrétion et de dégradation. En régulant le pH des organites et via son couplage à des réseaux de détection des nutriments tels que mTORC1 au niveau du lysosome, l’activité de la V-ATPase influence le métabolisme cellulaire, les réponses au stress et le renouvellement des protéines membranaires. Une dérégulation de la fonction de la V-ATPase et une altération de l’homéostasie du pH compartimental ont été associées à des phénotypes pertinents pour la neurodégénérescence, l’invasion tumorale/le potentiel métastatique, ainsi qu’à des défauts de traitement des antigènes et de signalisation immunitaire, ce qui fait d’ATP6V1C1 une cible utile pour des études mécanistiques de la biologie dépendante de l’acidification.

V-ATPase C1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ATP6V1C1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ATP6V1C1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ATP6V1C1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ATP6V1C1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.