Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
V-ATPase A1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400975-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- V-ATPase A1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il V-ATPase A1 Double Nickase Plasmid (h) e il V-ATPase A1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ATP6V0A1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: V-ATPase A1 Antibody (E-8): sc-374475
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
V-ATPase A1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400975-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
V-ATPase A1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400975-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP6V0A1 codifica l’isoforma a1 della subunità a del dominio V0 della H\+-ATPasi vacuolare (V-ATPasi), una pompa protonica multisubunità che acidifica endosomi, lisosomi e vescicole secretorie. L’acidificazione degli organelli mediata dalla V-ATPasi sostiene l’endocitosi mediata da recettore, la degradazione lisosomiale, l’autofagia e il traffico vescicolare, e influenza la segnalazione di mTORC1 e il sensing cellulare dei nutrienti attraverso la funzione del lisosoma. Tramite il controllo del pH luminale, V-ATPasi A1 contribuisce anche alla proteostasi e agli eventi di fusione di membrana necessari per un efficiente smistamento del carico. La disregolazione dell’attività della V-ATPasi e dell’acidificazione endolisosomiale è stata collegata a fenotipi di neurosviluppo e neurodegenerazione, ad alterazioni della funzione sinaptica e a difetti più ampi dell’omeostasi cellulare rilevanti per i meccanismi di malattia.
V-ATPase A1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ATP6V0A1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ATP6V0A1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ATP6V0A1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ATP6V0A1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.