USP45 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m2): sc-429548-LAC-2

O gene Usp45 de camundongo codifica a enzima desubiquitinante USP45, uma protease específica de ubiquitina que regula o turnover proteico ao remover cadeias de ubiquitina e, assim, modular a estabilidade e a atividade de substratos nucleares-chave. A USP45 tem sido implicada na manutenção do genoma por meio de funções no reparo de DNA e em respostas ao estresse associado à replicação, conectando-a a vias que preservam a integridade da cromatina e coordenam a progressão do ciclo celular. A desubiquitinação desregulada e o comprometimento do processamento de danos ao DNA associados a alterações na USP45 são relevantes para estudos de fenótipos de instabilidade genômica e de mecanismos relacionados ao câncer. Ferramentas de pesquisa para Usp45/USP45 apoiam investigações sobre sinalização por ubiquitina, mapeamento de redes de resposta ao dano ao DNA e genômica funcional em células de camundongo e em modelos in vivo.

As Partículas de Ativação Lentivirais USP45 (m2) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Usp45 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais USP45 (m2) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Usp45, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de USP45. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Usp45 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.