USP4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403543-ACT

ユビキチン特異的ペプチダーゼ4（USP4）は、標的基質からユビキチン鎖を除去することで、タンパク質の安定性およびシグナル伝達の出力を制御する脱ユビキチン化酵素である。ヒト細胞においてUSP4は、TGF-β/SMADシグナル、NF-κBに連動した炎症応答、受容体トラフィッキングなどの主要経路を調節し、転写プログラム、プロテオスタシス、ストレス適応プロセスに影響を与える。ユビキチン依存的な分解・ターンオーバーへの作用を介して、USP4は細胞増殖、アポトーシス、免疫シグナルのダイナミクスの制御にも寄与する。USP4の活性や発現の破綻は、がん生物学や炎症性疾患の機序におけるシグナル恒常性の変化と関連づけられており、経路解析の観点から重要なノードとなっている。

USP4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性USP4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

USP4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における USP4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はUSP4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性USP4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のUSP4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるUSP4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびUSP4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるUSP4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。