USP2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-424700

概要

Usp2 は、ユビキチン特異的ペプチダーゼ2（USP2）をコードしており、ユビキチン依存的なタンパク質分解回転を逆転させる脱ユビキチン化酵素として、プロテオスタシスとシグナル持続時間の調節に関与します。USP2 は選択的基質上のユビキチン鎖を切断・短縮することで、細胞周期の進行、アポトーシス、DNA損傷応答、炎症性シグナル伝達などの過程を調節し、代謝および概日リズムのプログラム制御とも関連づけられています。USP2 活性の変化は、実験モデルにおいて増殖制御の破綻やストレス適応の異常表現型と関連しており、細胞恒常性に対するユビキチン–プロテアソーム系の制御を解析するうえで有用な結節点となります。マウス系では、Usp2 の改変（撹乱）は、脱ユビキチン化が組織や免疫関連の文脈で経路間クロストークをどのように微調整するかを研究するために一般的に用いられます。

USP2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるUsp2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Usp2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Usp2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、USP2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、USP2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Usp2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• USP2の機能に不可欠なUsp2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Usp2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• USP2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびUSP2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Usp2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  USP2 HDRプラスミド（m）および USP2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはUsp2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のUsp2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。