USF-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423628-ACT

O fator estimulador upstream 1 (Usf1) codifica o fator de transcrição USF-1, uma proteína do tipo hélice–alça–hélice básica com zíper de leucina que se liga a motivos E-box para coordenar programas de expressão gênica que controlam o metabolismo celular, a diferenciação e as respostas ao estresse. Em células de camundongo, o USF-1 integra sinais nutricionais e hormonais para regular a homeostase de lipídios e glicose, vias mitocondriais e oxidativas e redes transcricionais associadas ao ritmo circadiano. Por meio de sua atividade em nível de promotores e enhancers, o USF-1 influencia a acessibilidade da cromatina e a produção transcricional em tecidos metabólicos e em contextos relevantes para a imunidade. A atividade desregulada de USF1/USF-1 tem sido associada a fenótipos cardiometabólicos, incluindo alterações no manejo de lipoproteínas e na sensibilidade à insulina, sustentando seu uso em estudos mecanísticos da biologia das doenças metabólicas.

USF-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Usf1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

USF-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Usf1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Usf1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de USF-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Usf1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de USF-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via USF-1 em células tumorais com expressão de Usf1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.