UNC5H3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403782-ACT

UNC5C は、ヒトのネトリン受容体 UNC5H3 をコードしている。UNC5H3 は依存性受容体であり、化学反発性の誘導シグナルを介して、軸索誘導、神経細胞移動、シナプス構築に寄与する。ネトリン-1 との結合およびそれに続く下流シグナル伝達を通じて、UNC5H3 は細胞骨格ダイナミクス、接着性、アポトーシス感受性に影響し、組織構築や神経回路形成を規定する複数の経路からの入力を統合する。UNC5C の活性や発現の変化は、神経発生に関わる表現型や、がん生物学および神経変性疾患の文脈で関与が示唆される細胞運動プログラムの破綻と関連づけられている。細胞表面のガイダンス受容体として、UNC5H3 は受容体トラフィッキング、リガンド依存的シグナル伝達、状況依存的な生存シグナルの研究にも有用である。

UNC5H3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性UNC5Cの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

UNC5H3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における UNC5C 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はUNC5C転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性UNC5H3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のUNC5C遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるUNC5H3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびUNC5C発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるUNC5H3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。