Plasmide Double Nickase (m) UHRF1: sc-421937-NIC

Uhrf1 code pour UHRF1, un régulateur épigénétique multidomaine qui couple la reconnaissance de l’ADN CpG hémiméthylé au recrutement de la machinerie de maintenance de la méthylation de l’ADN pendant la phase S. Grâce à ses domaines SRA, PHD et RING, UHRF1 coordonne l’héritage de la méthylation de l’ADN, le dialogue entre modifications des histones et le remodelage de la chromatine afin de préserver la stabilité du génome et les programmes transcriptionnels. Dans les cellules de souris, l’activité de UHRF1 est étroitement liée à la progression du cycle cellulaire, à l’assemblage de la chromatine couplé à la réplication et à la répression des éléments transposables, avec des effets en aval sur la différenciation et l’engagement de lignée. Une maintenance épigénétique associée à UHRF1 dérégulée est largement impliquée dans la transformation oncogénique, la prolifération aberrante et l’instabilité de l’épigénome, faisant de Uhrf1 un nœud clé pour les études mécanistiques de la régulation génique dépendante de la méthylation.

UHRF1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Uhrf1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Uhrf1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Uhrf1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Uhrf1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.