UGT2B10 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404210-ACT

UGT2B10 codifica una UDP‑glucuronosiltransferasi umana che catalizza la glucuronidazione di substrati endogeni e xenobiotici, aumentandone la solubilità per l’eliminazione tramite il metabolismo di fase II. Questo enzima associato al reticolo endoplasmatico contribuisce alle reti di detossificazione epatiche ed extraepatiche, che interagiscono con le risposte allo stress ossidativo e con le vie coinvolte nella gestione dei farmaci. Variazioni nell’espressione o nell’attività di UGT2B10 sono state correlate a differenze interindividuali nel metabolismo di alcune ammine e di altri composti, influenzando i profili di esposizione e la lettura dei biomarcatori. Di conseguenza, UGT2B10 è spesso oggetto di studio in farmacogenomica, biologia chimica e in modelli di funzione epatica e omeostasi metabolica.

UGT2B10 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di UGT2B10 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

UGT2B10 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus UGT2B10 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione UGT2B10, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di UGT2B10. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus UGT2B10 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da UGT2B10 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via UGT2B10 nelle cellule tumorali con espressione di UGT2B10 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.