Plasmide CRISPR d'Activation (h) UGT2B10: sc-404210-ACT

UGT2B10 code une UDP‑glucuronosyltransférase humaine qui catalyse la glucuronidation de substrats endogènes et xénobiotiques, augmentant leur solubilité afin de faciliter leur élimination via le métabolisme de phase II. Cette enzyme associée au réticulum endoplasmique contribue aux réseaux de détoxification hépatiques et extra‑hépatiques, en interaction avec les réponses au stress oxydatif et les voies de prise en charge des médicaments. Des variations de l’expression ou de l’activité d’UGT2B10 ont été associées à des différences interindividuelles dans le métabolisme de certaines amines et d’autres composés, modulant les profils d’exposition et les mesures de biomarqueurs. En conséquence, UGT2B10 est fréquemment étudié en pharmacogénomique, en biologie chimique et dans des modèles de fonction hépatique et d’homéostasie métabolique.

UGT2B10 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de UGT2B10 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

UGT2B10 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus UGT2B10 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription UGT2B10, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de UGT2B10. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus UGT2B10 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de UGT2B10 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie UGT2B10 dans les cellules tumorales présentant une expression de UGT2B10 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.