UGT2B CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404208-ACT

ヒトUGT2B4は、UGT2Bサブファミリーに属するUDP-グルクロン酸転移酵素をコードしており、内因性ステロイド、胆汁酸関連代謝物、および多様な異物（xenobiotics）のグルクロン酸抱合を触媒して、それらの溶解性を高め、排泄を促進する。この酵素活性は、小胞体に関連した解毒ネットワークにおける第II相代謝を支え、核内受容体シグナル伝達やレドックス恒常性によって制御される肝クリアランス経路とも連携している。UGT2B4の発現量や活性の変動は、ステロイドホルモンの体内動態や異物の処理を変化させ得るため、個人差のある薬物代謝、内分泌調節、代謝ストレス表現型の研究において重要である。UGT2Bのより広い機能的な枠組みの一部として、UGT2B4は、細胞が生理活性をもつ低分子にどの程度曝露されるかを形作る輸送系や抱合系とあわせて検討されることが多い。

UGT2B4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性UGT2B4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

UGT2B4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における UGT2B4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はUGT2B4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性UGT2B4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のUGT2B4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるUGT2B4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびUGT2B4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるUGT2B4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。