Plasmide CRISPR d'Activation (h) UFM1: sc-416900-ACT

Le gène humain **UFM1** code l’« ubiquitin-fold modifier 1 », une protéine de type ubiquitine qui est conjuguée à des substrats via la cascade d’UFMylation impliquant **UBA5**, **UFC1** et **UFL1**. Cette modification post-traductionnelle régule la protéostasie du réticulum endoplasmique, le contrôle qualité associé aux ribosomes, ainsi que les réponses cellulaires au stress protéotoxique et oxydatif, avec des liens établis avec l’homéostasie du RE et le fonctionnement de la voie sécrétoire. La signalisation dépendante d’UFM1 a été impliquée dans des phénotypes neurodéveloppementaux et hématologiques, et l’altération de l’activité d’UFMylation est étudiée dans le contexte de la survie des cellules cancéreuses et de l’adaptation au stress. En tant que modificateur central de cette voie, UFM1 constitue un nœud utile pour analyser comment la conjugaison de type ubiquitine module le renouvellement des protéines, le contrôle de la traduction et les réponses au stress des organites.

UFM1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de UFM1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

UFM1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus UFM1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription UFM1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de UFM1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus UFM1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de UFM1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie UFM1 dans les cellules tumorales présentant une expression de UFM1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.