UFM1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-416900-ACT

ヒトUFM1は、ユビキチン様タンパク質であるubiquitin-fold modifier 1をコードしており、UBA5、UFC1、UFL1が関与するUFM化（UFMylation）カスケードを介して基質タンパク質に結合（コンジュゲーション）されます。この翻訳後修飾は、小胞体（ER）におけるプロテオスタシス、リボソーム関連品質管理、ならびにタンパク質毒性ストレスや酸化ストレスに対する細胞応答を制御し、ER恒常性および分泌経路機能との関連が確立されています。UFM1依存性シグナル伝達は神経発生および血液学的表現型に関与するとされ、UFM化活性の変化は、がん細胞の生存やストレス適応との関連で研究されています。本経路の中核となる修飾因子として、UFM1は、ユビキチン様コンジュゲーションがタンパク質分解回転、翻訳制御、オルガネラのストレス応答をどのように調整するかを解明するための有用な結節点となります。

UFM1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性UFM1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

UFM1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における UFM1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はUFM1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性UFM1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のUFM1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるUFM1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびUFM1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるUFM1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。