Plasmide Double Nickase (h) Ubr4: sc-408481-NIC

UBR4 code pour Ubr4, un grand facteur associé aux ligases ubiquitine, impliqué dans le contrôle qualité des protéines dépendant de l’ubiquitine et dans la régulation du renouvellement protéique. En participant à des processus liés à la règle du N-end ainsi qu’à des réseaux plus larges de protéostasie, Ubr4 influence l’homéostasie cellulaire, les réponses au stress et des dynamiques du cytosquelette ou associées aux membranes qui façonnent la morphologie cellulaire et le trafic intracellulaire. La perturbation de la signalisation ubiquitine et de la protéostasie est pertinente pour les mécanismes sous-jacents à la neurodégénérescence, à la biologie du cancer et à d’autres troubles caractérisés par une stabilité protéique altérée et une adaptation de la signalisation. En tant que gène humain largement exprimé dans les tissus, UBR4 est fréquemment étudié pour comprendre comment la régulation médiée par l’ubiquitine s’intègre aux voies du développement et de l’homéostasie.

Ubr4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus UBR4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de UBR4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de UBR4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de UBR4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.