CRISPRデータではありません：画像はCRISPR実験結果を可視化するための抗体の品質を示しています。
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Ubr4 Double Nickaseプラスミド (h): sc-408481-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Ubr4 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Ubr4ダブルニカースプラスミド（h）およびUbr4ダブルニカースプラスミド（h2）は、UBR4を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Ubr4 抗体 (21-Y): sc-100615
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Ubr4 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-408481-NIC | 20 µg | $410.00 |
UBR4 は Ubr4 をコードする遺伝子であり、Ubr4 はユビキチンリガーゼに関連する大型因子として、ユビキチン依存的なタンパク質品質管理やタンパク質分解（ターンオーバー）の制御に関与するとされています。N-end ルール関連過程や、より広範なプロテオスタシス（タンパク質恒常性）ネットワークへの関与を通じて、Ubr4 は細胞の恒常性、ストレス応答、ならびに細胞形態や細胞内輸送を形作る細胞骨格／膜関連ダイナミクスに影響を与えます。ユビキチンシグナル伝達とプロテオスタシスの破綻は、神経変性、がん生物学、その他タンパク質安定性の変化やシグナル適応を特徴とする疾患の基盤機構と関連します。ヒトでは多くの組織で広く発現する遺伝子であることから、UBR4 はユビキチン介在性制御が発生や恒常性維持の経路とどのように統合されるかを理解する目的で、一般的に研究されています。
Ubr4 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における UBR4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、UBR4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、UBR4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、UBR4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。