Ubr4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-427303

概要

Ubr4は、N-recogninファミリーに属するE3ユビキチンリガーゼをコードしており、不安定化を引き起こすN末端残基を認識してユビキチン依存的な分解を促進することで、タンパク質品質管理を支えます。マウス細胞では、Ubr4はプロテオスタシス（タンパク質恒常性）、タンパク質複合体の安定性制御、ストレス応答性の分解経路の協調に寄与し、ユビキチン–プロテアソーム系およびN-end rule経路の生物学と広く関連します。報告されている機能は膜輸送や神経の恒常性維持とも結び付いており、ユビキチンシグナル伝達やプロテオーム維持が破綻する神経発生・神経変性の機序研究において重要です。さらに、ユビキチン化は細胞周期制御、シグナル伝達、細胞骨格の組織化とも接点を持つため、Ubr4の撹乱は、正常状態および疾患関連状態においてユビキチンリガーゼがこれらの過程をどのように調節しているかを解析するうえで有用です。

Ubr4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるUbr4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ubr4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ubr4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Ubr4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Ubr4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ubr4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Ubr4の機能に不可欠なUbr4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ubr4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Ubr4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびUbr4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ubr4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Ubr4 HDRプラスミド（m）および Ubr4 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはUbr4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のUbr4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。