Ubr4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-408481

概要

ヒトUBR4は、E3ユビキチンリガーゼであるUbr4をコードしており、Ubr4はユビキチン依存的なタンパク質品質管理および分解（ターンオーバー）に寄与する大きな細胞質タンパク質である。Ubr4はN-end rule経路に関連するとともに、タンパク質の安定性、輸送、ならびにストレス適応的な細胞プロテオームの再編成に影響する、より広範なプロテオスタシス制御プログラムにも関与する。これらの役割を通じてUBR4は、エンドサイトーシス、細胞周期に関連したタンパク質制御、プロテオトキシックストレスへの応答などの過程に影響を及ぼし得る。ユビキチンシグナル伝達やプロテオスタシスの破綻は、神経変性様表現型やがん関連の細胞状態と関連づけられており、そのためUBR4はユビキチン経路の配線を機構的に解析する上で有用なノードとなる。

Ubr4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるUBR4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、UBR4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、UBR4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Ubr4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Ubr4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、UBR4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Ubr4の機能に不可欠なUBR4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、UBR4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Ubr4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびUbr4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、UBR4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Ubr4 HDRプラスミド（h）および Ubr4 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはUBR4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のUBR4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。