UBE2J1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405892

概要

UBE2J1は、小胞体（ER）膜に係留されたE2ユビキチン結合酵素をコードしており、E3リガーゼと協調して、ミスフォールドした基質や調節対象となる基質をユビキチン化し、プロテアソーム分解へ導きます。UBE2J1は小胞体関連分解（ERAD）に機能し、タンパク質品質管理をユビキチン–プロテアソーム系の活性と結び付け、細胞ストレス下でのER恒常性の維持に寄与します。プロテオスタシスの調節を介して、UBE2J1はアンフォールドタンパク質応答（UPR）シグナル、分泌タンパク質の成熟、膜結合タンパク質のターンオーバーに関連する経路へ影響を与えます。UBE2J1を含むERAD構成因子の機能不全は、プロテオトキシックストレスやユビキチン介在性タンパク質ターンオーバーの変化を特徴とする疾患の研究において重要な検討対象となります。

UBE2J1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるUBE2J1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、UBE2J1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、UBE2J1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、UBE2J1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、UBE2J1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、UBE2J1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• UBE2J1の機能に不可欠なUBE2J1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、UBE2J1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• UBE2J1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびUBE2J1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、UBE2J1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  UBE2J1 HDRプラスミド（h）および UBE2J1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはUBE2J1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のUBE2J1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。