Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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UBC9 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400859-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- UBC9 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- UBC9ダブルニカースプラスミド（h）およびUBC9ダブルニカースプラスミド（h2）は、UBE2Iを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: UBC9 抗体 (C-12): sc-271057
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
UBC9 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400859-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
UBC9 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400859-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
UBE2I は、SUMO を標的タンパク質へ転移させ、タンパク質の安定性、細胞内局在、ならびに巨大分子間相互作用を制御する唯一の E2 SUMO 結合酵素である UBC9 をコードする。SUMO 化を介して、UBC9 は DNA 損傷シグナル伝達と修復、細胞周期進行、クロマチン構造、転写プログラム、核‐細胞質間輸送に影響を与え、ストレス応答性経路をプロテオスタシスと統合している。UBC9 依存的 SUMO 化の破綻は、ゲノム維持機構の制御不全や転写制御の変容と関連づけられており、異常な SUMO 経路活性は、がんの生物学や神経変性に伴う細胞ストレス表現型においてしばしば観察される。SUMO カスケードの中心的ノードとして、UBC9 は主要基質の SUMO 依存的制御や経路間クロストークを解析するための有用な入口となる。
UBC9 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における UBE2I 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、UBE2I内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、UBE2Iの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、UBE2Iが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。