Plasmide Double Nickase (h) UBC9: sc-400859-NIC

UBE2I code pour UBC9, l’unique enzyme E2 de conjugaison de SUMO, qui transfère SUMO sur des protéines cibles afin de réguler la stabilité des protéines, leur localisation subcellulaire et les interactions macromoléculaires. Par la SUMOylation, UBC9 influence la signalisation et la réparation des dommages à l’ADN, la progression du cycle cellulaire, l’organisation de la chromatine, les programmes transcriptionnels et le transport nucléocytoplasmique, en intégrant des voies sensibles au stress à la protéostasie. Une perturbation de la SUMOylation dépendante d’UBC9 a été associée à un dérèglement du maintien du génome et à une altération du contrôle transcriptionnel, et une activité anormale de la voie SUMO est fréquemment observée dans la biologie des cancers et dans des phénotypes de stress cellulaire liés à la neurodégénérescence. En tant que nœud central de la cascade SUMO, UBC9 constitue un point d’entrée utile pour disséquer la régulation SUMO-dépendante de substrats clés et les interactions entre voies de signalisation.

UBC9 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus UBE2I dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de UBE2I. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de UBE2I. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de UBE2I.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.