twist CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400108-ACT

ヒトTWIST1は、メセンキム系譜のプログラムを統括し、細胞接着、運動性、細胞外マトリックス再構築に関わる遺伝子を転写レベルで制御することにより、上皮間葉転換（EMT）を調節する塩基性ヘリックス・ループ・ヘリックス（bHLH）型転写因子「Twist」をコードします。TWIST1は、TGF-β、WNT/β-カテニン、PI3K/AKTシグナル伝達など、発生過程やストレス応答性の経路からの入力を統合し、増殖、分化、生存を調節します。TWIST1活性の破綻は、形態形成の異常やEMT様状態の異常と関連しており、腫瘍の進行・浸潤・転移モデルで頻繁に研究されるほか、線維化や幹細胞様の細胞表現型にも関与します。転写可塑性の結節的な制御因子として、TWIST1は細胞状態遷移を司る遺伝子制御ネットワークを解析するために広く用いられています。

twist CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TWIST1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

twist CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TWIST1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTWIST1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性twistの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTWIST1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるtwist依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTWIST1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるtwist経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。