TWIK-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-405238-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TWIK-1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TWIK-1 Double-Nickase-Plasmid (h) und TWIK-1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf KCNK1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: TWIK-1: sc-517040
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TWIK-1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405238-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TWIK-1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405238-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KCNK1 codiert TWIK-1, einen Zwei-Poren-Domänen-Kaliumkanal (K2P), der eine Hintergrundleitfähigkeit für K⁺ bereitstellt und dazu beiträgt, das Ruhemembranpotenzial sowie den Eingangswiderstand in erregbaren und nicht erregbaren Zellen festzulegen. Die Aktivität von TWIK-1 trägt zur elektrischen Homöostase der Zelle bei und beeinflusst die Membranerregbarkeit, ionengekoppelten Transport sowie Reaktionen auf Veränderungen des extrazellulären pH-Werts und der Ionenzusammensetzung. In menschlichen Geweben wird TWIK-1 im Zusammenhang mit neuronaler Signalübertragung, Astrozytenphysiologie und Gefäßfunktion untersucht, da eine veränderte Aktivität von Kaliumkanälen die Netzwerkerregbarkeit und Barriereeigenschaften modulieren kann. Eine Fehlregulation der K2P-Kanalfunktion, einschließlich TWIK-1-assoziierter Mechanismen, wird häufig im Hinblick auf mögliche Beiträge zu phänotypischen Ausprägungen untersucht, die für neurologische und kardiovaskuläre Erkrankungen relevant sind.
TWIK-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des KCNK1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von KCNK1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die KCNK1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit KCNK1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.