TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-407927-ACT

TTF1 (fator de terminação da transcrição 1) é uma proteína nucleolar ligante de DNA que regula a transcrição pela RNA polimerase I ao promover a terminação da transcrição de genes de rRNA e ao organizar a estrutura da cromatina do rDNA. Ao controlar a terminação, as barreiras à forquilha de replicação e a arquitetura nucleolar, o TTF1 contribui para a biogênese de ribossomos, a estabilidade do genoma e programas de crescimento associados ao ciclo celular. Perturbações da transcrição de rDNA e respostas de estresse nucleolar ligadas a processos dependentes de TTF1 são frequentemente associadas à proliferação desregulada e à proteostase alterada na biologia relacionada ao câncer. Assim, o TTF1 serve como um nó útil para estudar a função nucleolar, a regulação de repetições de rDNA e a coordenação entre transcrição e replicação em células humanas.

TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TTF1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TTF1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TTF1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TTF/Transcription Termination Factor/TTF1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TTF1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 em células tumorais com expressão de TTF1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.