Plásmido CRISPR de Activación (h) TTF/Transcription Termination Factor/TTF1: sc-407927-ACT

TTF1 (factor de terminación de la transcripción 1) es una proteína nucleolar que se une al ADN y regula la transcripción por la ARN polimerasa I al promover la terminación de la transcripción de los genes de rRNA y organizar la estructura de la cromatina del rDNA. Al controlar la terminación, las barreras de la horquilla de replicación y la arquitectura nucleolar, TTF1 contribuye a la biogénesis de ribosomas, la estabilidad del genoma y los programas de crecimiento asociados al ciclo celular. La alteración de la transcripción del rDNA y de las respuestas de estrés nucleolar vinculadas a procesos dependientes de TTF1 se asocia con frecuencia a una proliferación desregulada y a una proteostasis alterada en la biología relacionada con el cáncer. Por ello, TTF1 constituye un nodo útil para estudiar la función nucleolar, la regulación de las repeticiones de rDNA y la coordinación transcripción–replicación en células humanas.

TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TTF1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TTF1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TTF1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TTF/Transcription Termination Factor/TTF1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TTF1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TTF/Transcription Termination Factor/TTF1 en células tumorales con expresión de TTF1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.