TRPC5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403745-ACT

O TRPC5 codifica um canal catiônico não seletivo, permeável a Ca2+, da família dos canais de potencial receptor transitório canônicos (TRPC), que contribui para a entrada de cálcio operada por receptores na membrana plasmática. O TRPC5 integra sinais a jusante de receptores acoplados à proteína G e de receptores tirosina-quinase por meio de vias dependentes de fosfolipase C, moldando a dinâmica intracelular de Ca2+ que regula a excitabilidade de membrana, a remodelação do citoesqueleto e respostas transcricionais. A atividade do canal tem sido associada à sinalização neuronal e sensorial, à fisiologia vascular e renal e à modulação da migração celular. A sinalização desregulada de TRPC5 é frequentemente estudada no contexto de comportamentos relacionados à dor e à ansiedade, de lesão de podócitos e mecanismos de doença renal proteinúrica, e da motilidade de células cancerosas e fenótipos de resposta a fármacos.

TRPC5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TRPC5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TRPC5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TRPC5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TRPC5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TRPC5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TRPC5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TRPC5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TRPC5 em células tumorais com expressão de TRPC5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.