Plasmide CRISPR/Cas9 KO TRPC4 (m): sc-423515

Présentation

Trpc4 code pour TRPC4, un canal cationique non sélectif de la famille des TRP canoniques, qui médie l’entrée de Ca²⁺ induite par les récepteurs et l’entrée de Ca²⁺ dépendante des stocks, en aval de la signalisation via les GPCR et la PLC. L’influx de Ca²⁺ dépendant de TRPC4 contribue à la dépolarisation de la membrane et à des programmes transcriptionnels dépendants du calcium, influençant des processus tels que la régulation de la barrière endothéliale, la contractilité du muscle lisse et l’excitabilité neuronale. Dans les systèmes murins, l’activité de TRPC4 est couramment étudiée dans des voies contrôlant le tonus et la perméabilité vasculaires, la motricité gastro-intestinale et des voies urinaires, ainsi que la signalisation synaptique. Une homéostasie du calcium liée à TRPC4 dérégulée a été associée à des phénotypes pertinents pour la recherche cardiovasculaire, inflammatoire et neurocomportementale, ce qui soutient son utilisation comme nœud mécanistique dans les études de signalisation et de physiologie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TRPC4 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Trpc4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Trpc4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Trpc4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TRPC4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Trpc4 pour l'étude de la signalisation de TRPC4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Trpc4 essentiels à la fonction de TRPC4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Trpc4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TRPC4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TRPC4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Trpc4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TRPC4 plasmide HDR (m) et le TRPC4 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Trpc4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Trpc4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.