TRPC4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423515

Übersicht

Trpc4 kodiert TRPC4, einen nichtselektiven Kationenkanal der kanonischen TRP-Familie, der nachgeschaltet von GPCR- und PLC-Signalwegen rezeptoroperierten und speicheroperierten Ca²⁺-Einstrom vermittelt. Der TRPC4-abhängige Ca²⁺-Einstrom trägt zur Depolarisation der Membran und zu calciumabhängigen Transkriptionsprogrammen bei und beeinflusst dadurch Prozesse wie die Regulation der endothelialen Barriere, die Kontraktilität glatter Muskulatur und die neuronale Erregbarkeit. In Mausmodellen wird die TRPC4-Aktivität häufig in Signalwegen untersucht, die Gefäßtonus und -permeabilität, die Motilität des Gastrointestinal- und Harntrakts sowie die synaptische Signalübertragung steuern. Eine fehlregulierte, TRPC4-gekoppelte Calciumhomöostase wurde mit Phänotypen in Verbindung gebracht, die für die kardiovaskuläre, entzündungsbezogene und neuroverhaltensbezogene Forschung relevant sind, was TRPC4 als mechanistischen Knotenpunkt für Studien zu Signaltransduktion und Physiologie unterstützt.

Das TRPC4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Trpc4-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Trpc4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Trpc4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TRPC4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Trpc4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TRPC4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Trpc4-Exone abzielen, die für die TRPC4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Trpc4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TRPC4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TRPC4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Trpc4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TRPC4 HDR-Plasmid (m) und TRPC4 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Trpc4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Trpc4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.