Troponin T-SS CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423460

概要

Tnnt1は、遅筋型骨格筋トロポニンT（Troponin T-SS）をコードします。これは薄フィラメントのトロポニン複合体の中核構成要素であり、トロポニンCによるCa²⁺結合をトロポミオシンの移動およびアクチン‐ミオシンのクロスブリッジサイクルへと連動させます。Troponin T-SSは、サルコメア収縮の反応速度（キネティクス）とCa²⁺感受性を調節することで、遅筋線維の機能特性を規定し、筋の発生や適応的リモデリングにも寄与します。TNNT1の発現量や配列の変化は遺伝性ミオパチーや収縮機能障害と関連しており、サルコメアの健全性、興奮収縮連関、線維タイプの規定を研究する上で重要です。マウス系では、Tnnt1の攪乱により筋力低下表現型の機序解明や、その下流にある転写応答およびプロテオスタシス（タンパク質恒常性）応答の検討が可能になります。

Troponin T-SS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTnnt1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tnnt1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tnnt1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Troponin T-SSタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Troponin T-SSシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tnnt1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Troponin T-SSの機能に不可欠なTnnt1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tnnt1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Troponin T-SS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTroponin T-SS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tnnt1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Troponin T-SS HDRプラスミド（m）および Troponin T-SS HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTnnt1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTnnt1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。