Plasmide CRISPR/Cas9 KO Troponin T-SS (m): sc-423460

Présentation

Tnnt1 code la troponine T lente du muscle squelettique (Troponin T-SS), un composant essentiel du complexe de troponine du filament fin, qui couple la liaison du Ca²⁺ par la troponine C au déplacement de la tropomyosine et au cycle des ponts actine–myosine. En régulant la cinétique de contraction du sarcomère et la sensibilité au Ca²⁺, la Troponine T-SS contribue à définir la fonction des fibres à contraction lente et participe au développement musculaire ainsi qu’au remodelage adaptatif. Une expression ou une séquence TNNT1 altérée est associée à des myopathies héréditaires et à une dysfonction contractile, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de l’intégrité sarcomérique, du couplage excitation–contraction et de la spécification des types de fibres. Dans les modèles murins, la perturbation de Tnnt1 permet d’explorer les mécanismes des phénotypes de faiblesse musculaire et les réponses transcriptionnelles et protéostatiques en aval.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Troponin T-SS (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tnnt1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tnnt1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tnnt1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Troponin T-SS.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tnnt1 pour l'étude de la signalisation de Troponin T-SS, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tnnt1 essentiels à la fonction de Troponin T-SS
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tnnt1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Troponin T-SS plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Troponin T-SS plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tnnt1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Troponin T-SS plasmide HDR (m) et le Troponin T-SS (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tnnt1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tnnt1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.