Tropomyosin γ CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401764

概要

TPM3は、ヒトのトロポミオシンγをコードしており、これはアクチンに結合するコイルドコイル型タンパク質で、フィラメント状アクチン（F-アクチン）を安定化し、ミオシンやアクチン関連因子が細胞骨格へアクセスすることを調節します。TPM3はアクチンフィラメントの動態を調整することで、細胞形状の制御、接着、遊走、収縮機能などを含む細胞骨格リモデリング過程に寄与します。トロポミオシンのアイソフォームは、メカノトランスダクションやストレスファイバーの組織化を制御するシグナル伝達経路と連携する、異なるアクチンフィラメント集団の特性を規定するのに役立ちます。TPM3の発現変化やTPM3が関与する再編成は、細胞骨格構築の破綻と関連し、腫瘍性の融合遺伝子形成や神経筋系の表現型などの文脈で報告されています。このため、細胞骨格駆動性の疾患メカニズムを調べる上で重要な対象となります。

Tropomyosin γ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTPM3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TPM3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TPM3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Tropomyosin γタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Tropomyosin γシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TPM3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Tropomyosin γの機能に不可欠なTPM3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TPM3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Tropomyosin γ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTropomyosin γ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TPM3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Tropomyosin γ HDRプラスミド（h）および Tropomyosin γ HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTPM3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTPM3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。