TRIM37 Double Nickaseプラスミド (h): sc-407390-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- TRIM37 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- TRIM37ダブルニカースプラスミド（h）およびTRIM37ダブルニカースプラスミド（h2）は、TRIM37を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: TRIM37 抗体 (C-6): sc-515044
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
TRIM37 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-407390-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TRIM37 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-407390-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TRIM37は、タンパク質のユビキチン化、プロテオスタシス（タンパク質恒常性）、および細胞周期関連プロセスを制御するTRIMファミリーのRING型E3ユビキチンリガーゼをコードします。TRIM37は細胞質および核周囲の区画に局在し、中心体および中心体周囲物質（PCM）の制御に関与することが示されており、ゲノム安定性と有糸分裂の忠実性に影響を及ぼします。ユビキチン依存的にシグナル伝達タンパク質や構造タンパク質を制御することで、TRIM37はDNA損傷応答、細胞増殖、ストレス適応を司る経路と連関します。TRIM37活性の異常は発達関連症候群と関連し、増殖制御の破綻やゲノム不安定性がみられる状況で報告されており、疾患生物学における機序解明研究の対象として重要であることを示唆します。
TRIM37 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における TRIM37 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、TRIM37内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、TRIM37の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、TRIM37が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。