Plasmide CRISPR/Cas9 KO TREM-1 (m): sc-425490

Présentation

Le récepteur déclencheur exprimé sur les cellules myéloïdes 1 (TREM-1) est un immunorécepteur principalement présent sur les neutrophiles et les monocytes/macrophages, qui amplifie les réponses inflammatoires initiées par les récepteurs de reconnaissance des motifs (pattern-recognition receptors). Chez la souris, la signalisation de TREM-1 s’intègre à des voies dépendantes d’adaptateurs pour potentialiser l’activation de NF-κB et des MAPK, augmentant la production de cytokines et de chimiokines pro-inflammatoires et renforçant les fonctions effectrices de l’immunité innée. L’activité de Trem1 est étroitement liée au recrutement et à l’activation des cellules myéloïdes, ainsi qu’au dialogue avec les compartiments endothélial et stromal lors de l’inflammation aiguë et chronique. Une signalisation TREM-1 dérégulée a été associée à des modèles de maladies inflammatoires et infectieuses, ainsi qu’à des phénotypes myéloïdes associés aux tumeurs et à des voies de lésions tissulaires dues à des réponses cytokinique excessives.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TREM-1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Trem1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Trem1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Trem1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TREM-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Trem1 pour l'étude de la signalisation de TREM-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Trem1 essentiels à la fonction de TREM-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Trem1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TREM-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TREM-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Trem1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TREM-1 plasmide HDR (m) et le TREM-1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Trem1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Trem1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.