TRB-3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-432803-ACT

O gene Trib3 de camundongo codifica a TRB-3, uma pseudocinase cataliticamente inativa que atua como adaptadora, regulando a transdução de sinais, programas transcricionais e a renovação/degradação de proteínas. A TRB-3 é mais conhecida por modular a sinalização PI3K–AKT por meio da interação com a AKT e componentes relacionados da via, influenciando assim o metabolismo de glicose e lipídios, decisões de sobrevivência celular e a expressão gênica responsiva ao estresse. Trib3 é induzido por estresse do retículo endoplasmático e por vias da resposta integrada ao estresse, conectando a disponibilidade de nutrientes e a proteostase à adaptação celular. A atividade desregulada da TRB-3 tem sido associada à resistência à insulina, inflamação metabólica e efeitos dependentes do contexto sobre proliferação e apoptose, sustentando seu uso como um nó mecanístico em estudos de biologia metabólica e do estresse.

TRB-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Trib3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TRB-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Trib3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Trib3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TRB-3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Trib3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TRB-3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TRB-3 em células tumorais com expressão de Trib3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.