TRAP220 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400855-ACT

MED1（TRAP220）は、配列特異的転写因子をRNAポリメラーゼIIに結び付け、転写開始およびエンハンサー依存的転写を協調的に制御するメディエーター複合体の中核サブユニットです。核内受容体の共活性化因子として、TRAP220はホルモンおよび代謝経路からのシグナルを統合し、増殖、分化、ならびに細胞ストレス応答を制御するプログラムの調節に関与します。MED1依存的な転写制御はクロマチンリモデリングやエピジェネティック制御とも交差し、系譜（リネージュ）決定や、状況依存的な腫瘍性転写状態に影響を与えます。MED1活性の破綻やメディエーターシグナル伝達の変化は、ホルモン応答性がんや、転写・代謝の不均衡を伴うその他の疾患と関連しており、転写制御機構の解明研究における有用な標的となっています。

TRAP220 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MED1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TRAP220 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MED1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMED1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TRAP220の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMED1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTRAP220依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMED1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTRAP220経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。