Plasmide CRISPR/Cas9 KO TRAF7 (h): sc-404992

Présentation

TRAF7 code une ligase E3 de l’ubiquitine ainsi qu’une protéine adaptatrice de la famille des facteurs associés aux récepteurs du TNF (TRAF), qui intègre la signalisation proximale aux récepteurs avec un contrôle de la stabilité des protéines dépendant de l’ubiquitine. TRAF7 régule plusieurs voies de stress et inflammatoires, notamment les voies MAPK et NF-κB, et influence l’apoptose, l’organisation du cytosquelette et la polarité cellulaire via l’ubiquitination de composants clés de la signalisation. Une activité de TRAF7 dérégulée et des mutations récurrentes de TRAF7 ont été rapportées dans plusieurs contextes tumoraux, étayant des rôles dans la signalisation oncogénique, le contrôle transcriptionnel et les réponses du microenvironnement. En tant que nœud de voie, TRAF7 est fréquemment étudiée dans le cadre de la protéostasie, de la transduction du signal et du contrôle de la croissance dépendant du contexte.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TRAF7 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TRAF7 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TRAF7, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TRAF7 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TRAF7.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TRAF7 pour l'étude de la signalisation de TRAF7, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TRAF7 essentiels à la fonction de TRAF7
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TRAF7 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TRAF7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TRAF7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TRAF7. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TRAF7 plasmide HDR (h) et le TRAF7 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TRAF7 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TRAF7 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.