TRα CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401475-ACT

THRA は甲状腺ホルモン受容体α（TRα）をコードしており、リガンド依存的に活性化される核内受容体として、甲状腺ホルモン応答配列に結合し、細胞代謝・増殖・分化・発生を制御する転写プログラムを調節する。TRα シグナル伝達は、コリガレーター依存的なクロマチンリモデリングと統合されるとともに、ミトコンドリア機能、細胞周期制御、組織特異的遺伝子発現を担う経路とも交差する。甲状腺ホルモン受容体活性の破綻や THRA 発現の変化は、発生異常や内分泌関連の表現型と関連づけられており、TRα 依存的な転写プログラムは、心臓、骨格、神経などの生物学的文脈でしばしば研究対象となる。転写因子としてのハブ（ノード）として、THRA はヒト細胞におけるホルモン応答性遺伝子ネットワークや、遺伝子発現制御のエピジェネティック機構を解析するためにも用いられる。

TRα CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性THRAの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TRα CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における THRA 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTHRA転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TRαの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTHRA遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTRα依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTHRA発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTRα経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。