TPPII CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403717-ACT

ヒトのTPP2は、トリペプチジルペプチダーゼII（TPPII）をコードしており、ユビキチン–プロテアソーム系によって生成されたオリゴペプチドをトリミングし、タンパク質の品質管理および細胞内ペプチドの代謝回転を支える、大型の細胞質セリン型エキソペプチダーゼである。ペプチド処理を制御することで、TPPIIはプロテオスタシス、MHCクラスI提示のための抗原ペプチドの利用可能性、ならびに細胞生存やアポトーシスに関わるストレス適応経路に影響を及ぼす。TPP2／TPPII活性の変化は、プロテオリシス（タンパク質分解）の異常や免疫関連表現型と関連づけられており、プロテアソーム補償機構、炎症シグナル伝達、プロテオトキシックストレス下での細胞状態遷移の機構研究において重要である。したがってTPP2は、ヒトモデル系において、細胞質ペプチダーゼがタンパク質分解経路およびその下流の細胞応答をどのように形作るかを解明するための有用な結節点となる。

TPPII CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TPP2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TPPII CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TPP2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTPP2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TPPIIの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTPP2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTPPII依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTPP2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTPPII経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。