Particules Lentivirales d'Activation (h) TP53INP1: sc-402835-LAC

TP53INP1 (tumor protein p53 inducible nuclear protein 1) est un régulateur induit par le stress qui intègre les programmes transcriptionnels dépendants de p53 aux réponses cellulaires aux dommages de l’ADN, au stress oxydatif et à la privation de nutriments. La protéine TP53INP1 participe au contrôle des points de contrôle du cycle cellulaire, de l’apoptose et de l’autophagie, en partie via un dialogue avec la signalisation de p53 et des voies associées à MAPK/JNK qui façonnent l’adaptation au stress. Une expression altérée de TP53INP1 a été rapportée dans de multiples contextes cancéreux et est également liée à des phénotypes inflammatoires et métaboliques, ce qui en fait un nœud utile pour analyser comment la signalisation de stress influence les décisions de destin cellulaire. Ces fonctions font de TP53INP1 un indicateur mécanistique pour les études des réseaux transcriptionnels de stress et du remodelage des voies en aval.

Les particules d'activation lentivirales TP53INP1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de TP53INP1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TP53INP1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription TP53INP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TP53INP1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif TP53INP1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.